顯微熒光光譜儀主要從以下方面進(jìn)行熒光特性研究:
1.激發(fā)光譜:通過改變激發(fā)光的波長(zhǎng),測(cè)量在不同激發(fā)波長(zhǎng)下樣品的熒光強(qiáng)度,從而得到激發(fā)光譜。這有助于確定能夠有效激發(fā)樣品熒光的波長(zhǎng)范圍,進(jìn)而選擇合適的激發(fā)光源,以獲得強(qiáng)的熒光信號(hào)。
2.發(fā)射光譜:在固定的激發(fā)波長(zhǎng)下,掃描樣品所發(fā)射的熒光的波長(zhǎng),記錄不同波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度,得到發(fā)射光譜。發(fā)射光譜反映了熒光物質(zhì)在特定激發(fā)條件下發(fā)射熒光的波長(zhǎng)分布,可用于分析樣品的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)信息。
3.熒光強(qiáng)度:熒光強(qiáng)度是指樣品在特定激發(fā)條件下發(fā)射熒光的強(qiáng)弱程度。它與樣品中熒光物質(zhì)的濃度、量子產(chǎn)率、儀器的檢測(cè)效率等因素有關(guān)。通過測(cè)量熒光強(qiáng)度,可以對(duì)樣品中熒光物質(zhì)的含量進(jìn)行定量或半定量分析。
4.偏振熒光:利用熒光各向異性來對(duì)熒光的偏振特性進(jìn)行定量分析,從而獲取生物大分子的取向信息及其動(dòng)態(tài)。例如,在生物領(lǐng)域中,可用于研究蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化。
5.熒光發(fā)光量子產(chǎn)率:指物質(zhì)發(fā)射出的光子數(shù)和吸收的光子數(shù)之比,用于衡量熒光物質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)化為熒光的能力。通過測(cè)量熒光發(fā)光量子產(chǎn)率,可以了解樣品的熒光效率,對(duì)于研究物質(zhì)的光學(xué)性質(zhì)和能量轉(zhuǎn)換過程具有重要意義。
6.熒光壽命:是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間,通常為納秒量級(jí)。熒光壽命是反映熒光分子結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)特性的重要參數(shù),通過測(cè)量熒光壽命,可以了解樣品中熒光物質(zhì)的微環(huán)境、分子間相互作用以及化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等信息。
